什么是磷酸化蛋白質

蛋白質磷酸化是指在激酶催化作用下把ATP或者GTP的磷酸基團（P04）轉移到不同種類的氨基酸上（主要包括絲氨酸S、蘇氨酸T、酪氨酸Y），從而使蛋白質發(fā)生翻譯后修飾的過程。該修飾是蛋白質翻譯后修飾（PTM）中為重要的形式，具有顯著的生物學功能，細胞增殖和凋亡，良性發(fā)育，信號轉導，新陳代謝，腫瘤發(fā)生等過程都有磷酸化蛋白質的插足，研究磷酸化蛋白質對探究生物學病變機理有著非常重要的意義。

富集磷酸化蛋白質重要性

磷酸化蛋白質具有低豐度和高動態(tài)性的特點，因此對磷酸化蛋白質組學研究首先需要對磷酸化蛋白樣品進行富集，降低樣品復雜程度和提高磷酸化位點鑒定數目。固相金屬離子親和色譜法（IMAC）是磷酸化蛋白質組學研究中常用的磷酸化蛋白質富集技術之一。

Welchrom® Ti Poss (phosphate ester)

固相金屬離子親和填料

Welchrom® Ti Poss (phosphate ester) 是月旭科技推出的的新一代固相金屬離子親和填料，金屬離子Ti??鰲合在磷酸酯 (phosphate ester) 為配基的多級孔雜化整體材料上形成的親和填料，利用磷酸化基團與固相化的Ti??的高親和力來富集磷酸化蛋白質。磷酸化蛋白質上的磷酸基團中的三個氧原子分別與富集材料上的三個不同Ti??螯合以形成穩(wěn)定的八面體形的配位結構，這種配位方式提供了良好的結合能力。該填料具有吸附量大、選擇性好、成本低、適用范圍廣、操作簡單特點。

規(guī)格參數

應用案例

（a）β-酪蛋白酶解液直接進行分析的 MALDI TOF-MS譜圖和（b）Welchrom® Ti Poss材料富集后分析的MADLI TOF-MS譜圖

實驗條件：0.1µg β-酪蛋白酶解液；采用80% ACN/6% TFA水溶液作為富集溶液，去除上清溶液后，依次用洗滌溶液A（50% ACN/6% TFA/200 mM NaCl）和溶液B（30%ACN/0.1%TFA）進行洗滌，后采用100 μL 10%（wt%）的氨水洗脫吸附在材料上的磷酸化肽段。

圖a中，未經過富集的β-酪蛋白酶解液樣品MALDI譜圖中，非磷酸化肽段的質譜信號峰非常強，嚴重影響了對磷酸化肽段的辨別。而經過Ti??-IMAC富集，從MADLI譜圖中（圖b）可以清晰的看到磷酸化肽段以及其去磷酸化肽段的信號峰，而且?guī)缀鯖]有出現任何非磷酸化肽段的信號峰。證實了Welchrom® Ti Poss富集對磷酸化肽段具有良好的富集能力。