色譜柱的正確使用
色譜柱是昂貴的色譜耗材，正確的使用和維護對保證色譜柱的正常使用和延長壽命至關重要。
1. 色譜柱使用前注意事項：
1) 色譜柱內的存儲液：
月旭公司色譜柱的存儲液，如沒有特殊說明均為質檢報告中所述流動相，檢測前，請用相互溶的試劑將其替換。
2) 新色譜柱的平衡：
新反相色譜柱：用純甲醇或者純乙腈沖洗色譜柱30個柱體積（1個柱體積=空柱管體積×0.7），再更換成能與檢測流動相互溶的流動相沖洗30個柱體積，zui后用流動相穩定系統至基線平穩；

新正相色譜柱：反相使用異丙醇低流速（0.2ml/min）沖洗30個柱體積；正相使用采用正己烷分析流速沖洗30個柱體積，再更換成能與檢測流動相互溶的溶劑沖洗30個柱體積，zui后用流動相沖洗穩定系統至基線平穩待檢測。

2. 色譜柱的使用方向：
月旭公司生產的液相色譜柱標簽上的箭頭方向為流動相流向，使用過程時也按此方向連接出入口，避免雙向混用，導致兩端填料同時污染，不利于色譜柱的再生和維護。
3.流動相和樣品保持潔凈：
由于懸浮在樣品或流動相中的細小顆粒會堵塞色譜柱兩端的篩板，各種試劑盡量使用色譜純級的，用量少的試劑純度至少是分析純，水是超純水和全玻璃器皿雙蒸水，使用前建議用0.45μm的濾膜過濾；

樣品溶液使用針頭式過濾器；
樣品中的雜質是造成色譜柱污染、柱效下降的zui主要原因之一，復雜樣品可選樣品預處理柱（SPE柱）進行前處理，如果不方便處理，建議使用與分析柱相匹配的保護柱。樣品溶劑與流動相要相匹配，不能出現樣品溶劑與流動相不互溶，極性相差太大等情況，否則會造成色譜峰形變差、鬼峰等現象，使用流動相溶解樣品能有效的避免上述情況發生。
4.色譜柱允許使用的pH范圍：
每款色譜柱都有自己特定允許使用的pH范圍，請仔細對照您的色譜柱的使用pH范圍（表一），在pH范圍以外使用，會使硅膠基質溶解或鍵合相水解，對色譜柱造成不可恢復的損傷，如果在臨界pH處使用，分析結束后立即用適合于色譜柱保存并與當前使用的流動相互溶的淋洗液置換掉。

色譜柱的保存
短時間保存：
間隔不超過四天，色譜柱按平時維護程序沖洗至基線平穩，反相色譜柱保存在不含有緩沖鹽、離子對試劑的有機相/水溶液中，有機相不低于20%；正相色譜柱正相使用保存在純正己烷中，反相使用保存在純有機溶劑中，并將隨柱的塑料堵頭旋緊密封。
長期保存：
反相色譜柱保存在80%甲醇或80%乙腈水溶液中；正相色譜柱正相使用保存在純正己烷中，反相使用時需將柱內存儲液用異丙醇置換，zui后用正己烷保存，將色譜柱從儀器上取下，并將隨柱的塑料堵頭旋緊密封。

色譜柱的日常維護（推薦反向沖洗）：
反相使用（包括反相色譜柱和正相色譜柱反相使用）清洗方法：
1) 未使用緩沖鹽，分析完成后用80%甲醇或80%乙腈反向沖洗色譜柱10-20個柱體積，保存柱子；
2) 使用緩沖鹽，用過渡流動相或者低比例有機相反向沖洗柱子10-20個柱體積去除緩沖鹽，用80%甲醇或80%乙腈反向沖洗色譜柱10-20個柱體積，保存柱子；
3) 使用離子對試劑，用過渡流動相或者低比例有機相反向沖洗柱子10-20個柱體積去除緩沖鹽，再用50%甲醇反向沖洗柱子10個柱體積，zui后用80%甲醇反向沖洗色譜柱10-20個柱體積，保存柱子。
正相使用（正相色譜柱正相使用）清洗方法：
分析結束后，用異丙醇反向沖洗10~20個柱體積再換正己烷反向沖洗柱子10-20個柱體積，保存柱子。

色譜柱的異常維護（按照日常維護沖洗方向）
1. 柱壓升高
柱壓升高是每個色譜工作者都很頭疼的問題，長時間使用造成柱壓的緩慢升高通常是正常現象；短時間甚至是突然的柱壓升高通常是異常升高，排除儀器的故障，確定是色譜柱自身原因，一般有以下幾點：

1) 柱頭的過濾篩板污染（固體顆粒物堵塞、強保留物質累積）：

解決方法：
a.在柱前端加上在線過濾器或保護柱，用甲醇/水=20/80 1.0ml/min反向沖洗色譜柱180min；

b.在柱前端加上在線過濾器或保護柱，反向使用；
c.可將柱頭打開，將色譜柱頭中過濾篩板取出，在稀硝酸溶液內超聲清洗20min，純水超聲清洗20min，zui后用甲醇超聲清洗20min，重新裝入色譜柱。

2) 柱頭填料污染（固體顆粒物堵塞、強保留物質累積）：
解決方法：
a.用可以溶解污染物的溶劑較長時間（180min）反向沖洗色譜柱；
b.可將柱頭打開，小心取出被污染的填料，用相同的填料重新裝入修復。
3) pH使用不當造成的損傷：
解決方法：
pH使用不當造成固定相的缺失或塌陷，很難使色譜柱恢復，只能更換色譜柱。

2. 推薦使用保護柱和在線過濾器：
樣品和流動相中不能*過濾掉及泵磨損、密封圈和管路老化產生的固體顆粒物，進入到色譜柱中就會堵塞篩板，導致柱壓升高，柱效下降，保護柱和在線過濾器上都有篩板，孔徑與分析柱的孔徑相同，能阻止顆粒物到達色譜柱，在分析故障中，柱壓升高占很大比例，因此建議您在色譜柱前端加上在線過濾器或者保護柱。
3. 緩沖鹽的正確使用：
緩沖鹽通常易溶于水，難溶于有機溶劑，其使用不當會析出，加快泵柱塞桿和密封圈，流通閥的磨損，堵塞色譜柱頭篩板，填料基質上的微孔和顆粒間的間隙，使填料板結柱壓升高，阻礙基質上鍵合相的碳鏈自由舒展，使色譜柱保留能力下降，柱效降低，縮短其使用壽命，緩沖鹽析出后很難去除，因此正確的使用緩沖鹽對延長色譜柱的使用壽命非常重要，具體方法如下：“使用前過渡! 使用后沖洗!”

分析前用過渡流動相沖洗柱體積5~10個柱體積，分析完成后按照色譜柱日常維護2)項處理；
過渡流動相：有機相和水相的比例和分析流動相中兩相比例一致，或者水相比例高于分析流動相，不含緩沖鹽。
緩沖鹽析出處理方案：
1) 方案1：用甲醇/水＝10/90以分析速度流速35℃條件下反向沖洗色譜柱40個柱體積；
2) 方案2：用甲醇/水＝10/90以0.2ml/min流速反向沖洗色譜柱過夜。

4. 避免強保留物質在色譜柱保留：
強保留物質和大分子化合物在色譜柱中累積，是一個緩慢的過程，一段時間后會對樣品成分產生額外的保留行為，引起峰變寬，拖尾，使柱效下降，保留時間變化，到一定程度時會導致柱壓升高，對許多樣品特別是復雜樣品很難判斷其是否含有強保留物質，因此要預防這一切的方式，堅持每天分析完成后用純甲醇或純乙腈反向沖洗色譜柱20個柱體積以上。但若長時間沒有反向沖洗的柱子，請謹慎反沖。
注意：不要輕易打開柱頭，因為柱頭一旦打開，很難恢復到新柱的水平，因為柱頭打開而造成的檢測后果，客戶自行負責。

各種鍵合相色譜柱的再生(請慎用)
色譜柱作為液相色譜中昂貴的色譜耗材，會隨著使用時間和進樣次數的增加，會出現異常的色譜現象，如果一根色譜柱的柱效太低或者柱壓太高，通常認為該色譜柱使用壽命已到，為了延長色譜柱的使用壽命，除了*按照每一款色譜柱的性能使用以外，適當的色譜柱再生是很有效的途徑：

1. 氰基(CN)色譜柱的維護和再生：
CN柱屬于中等極性的固定相，作反相色譜時操作和維護和C18柱*相同，增加水相比例，可以促進樣品的洗脫，但是CN屬于短鏈的鍵合相，水相比例太高易使CN鍵水解，尤其在色譜柱pH耐受范圍以外，酸性和堿性條件下柱壽命會下降很快，如果在這個條件下使用，需要按以下程序用15個柱體積溶液沖洗，如下：

過渡流動相–95%乙腈并保持95%乙腈繼續沖洗，以低流0.2mL/min過夜沖洗；
在pH耐受范圍條件使用時，也比較傷柱子，要注意沖洗，可以參照上述方法，時間可適當減少。CN柱用于正相時，當柱子使用一定時間后，柱效下降，可清洗一下恢復柱性能，再生時用10個柱體積的下列溶液沖洗：氯仿 –異丙醇–二氯甲烷再走流動相即可；

CN柱的pH范圍在pH 2.0-8.0。

2. 反相柱的再生：
反相色譜柱是使用zui普遍的色譜柱之一，除按照以上內容使用以外，必要的再生清洗可以有效的延長色譜柱的使用壽命，用下列每種溶劑20~30個柱體積沖洗：
100％甲醇–100％乙腈–100％異丙醇–100％二氯甲烷或100％正己烷–100％異丙醇–100％甲醇

3. 正相色譜柱的再生：

正相柱的鍵合官能團氨丙基、二羥基丙基等要比C18,C8柱的鍵合官能團易水解，所以其使用壽命稍短，特別是使用反相條件時，要嚴格控制pH值范圍，pH值越低流動相中水的比例越高越易發生水解。

填料被樣品中雜質累積污染，色譜柱表現行為柱壓增高柱效降低等，依次用下列程序沖洗柱子：
甲醇–乙腈–異丙醇–氯仿–正己烷–氯仿–異丙醇–甲醇（各以0.5ml/min的流速，20個柱體積），再換流動相。

用氨基柱檢測酸性物質可能會使略帶負電荷的氨基官能團質子化，一定程度上改變對某類的分析物保留性質或表現為柱效下降，再生建議是：用5-10個的柱體積的含0.5-1.0％NH3的50-50乙腈-水溶液沖洗（沖洗后用不含堿的流動相洗去多余的氨），分析酸性分析物時建議在流動相中略微添加少許氨如0.1％。

如何改善和提高正相色譜的重現性？
在正相色譜分離模式中，水是一種溶劑強度非常高的溶劑，即便流動相中有少量的存在就能對保留時間產生強烈的影響，特別是在硅膠或氧化鋁為固定相而使用的流動相非極性或疏水性很強的情況下尤
其是這樣。因為烷烴類溶劑天然含水量極低，基于無水烷烴的流動相，需要很長時間才能和環境中水分達成平衡。所以，正相色譜柱使用幾天后就觀察到保留時間有漂移的現象是司空見慣的。可能正是存在這個令人頭疼的問題，成為了當今正相色譜沒有反相色譜那么普及常用的主要原因。有一個非常有效的改善正相色譜保留時間重現性的方法：使用和水“半飽和”的正相流動相。
“半飽和”流動相配置方法：將無水的非極性流動相分成兩半；其中一半中加入一定量水，并混勻攪拌約一小時，靜止分層后，將多余的水相全部除去；將無水的一半流動相和已與水飽和過的另一半流
動相兩部分重新混合在一起，就配成了“半飽和”流動相。
正相色譜柱除水：
正相柱一般用的流動相是正己烷等非極性溶劑,水是強極性溶劑,正相色譜中用的量很少，水含量稍微一點的小變化，就會對出峰時間有很大的影響，所以正相色譜對水分含量極敏感。正相填料，硅膠、
氨基、CN基等，本身并無特殊，也不是碰到水就會損壞的。隨著時間的推移，正相填料會因為吸附了過多的水分而改性，導致保留能力改變，故需要按使用下列溶劑對固定相進行脫水：
含2.5% 二甲氧基丙烷（dimethoxypropane）和2.5% 冰醋酸的正己烷沖洗30個柱體積。